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四色多重免疫荧光试剂盒Plus(兔鼠通用二抗) ai 人妖
旨趣先容: 酪酰胺信号放大(TSA ，Tyramide signal amplification)技艺是一类应用辣根过氧化酶(HRP)对靶 卵白进行符号的酶学检测次序，访佛惯例免疫组化的 DAB 显色次序 ，TSA 技艺相通经受 HRP 符号的二 抗，相通有对应的“显色 ”智力(HRP 催化加入响应体系的酪胺荧光素底物，产生存化荧光底物，活化底 物可与抗原上的酪氨酸等残基共价说合，使样品上踏实的共价说合酪胺荧光素。之后用热竖立法粗鲁抗体 洗脱液洗去非共价说合的一抗-二抗-HRP 复合物，重迭下一种一抗-hrp 二抗来第二轮孵育，换另一种酪胺荧 光素底物，如斯往来就可已毕多重符号。
TSA 持重旨趣是应用酪胺 Tyramide 的过氧化物酶响应(酪胺盐在 HRP 催化 H202 下酿成共价键说合位 点) ，产生大都的酶促产物，该产物能与周围的卵白残基(包括色氨酸、组氨酸和酪氨酸残基)说合，这么在 抗原-抗体说合部位就有大都的荧光素千里积，斥逐使其检测信号得回 10- 100 倍增强。浅易来说，用这种次序 作念多重免疫荧光是应用二抗上带有的 HRP(而不是径直偶联荧光素)，来催化后续添加入体系的非活性荧 光素。荧光素在 HRP 和过氧化氢的作用下被活化，跟相近卵白的酪氨酸残基共价偶联，使得卵白样品与荧 光素踏实说合。然后微波或煮沸粗鲁水浴等热竖立惩处，前一轮非共价说合的抗体被洗掉，共价说合的荧 光素踏实共价说合在样本切片卵白上。再换个一抗来第二轮孵育，轮回往来。比及所有抗体孵育收尾，荧 光素都说合好后，终末去检测斥逐。 由于每次体系中都独一单一抗体孵育，因此无需精良抗体交叉响应， 以及一抗二抗种属匹配问题，大大减少了执行设想时不同种属抗体遴荐匹配的放手。也便是说，要是用 TSA 技艺，袪除张片子上所有的靶标都不错选定特异性高的兔单克隆抗体。搭配袪除支抗兔的 HRP 二抗就不错 进行执行，何况信号放大的倍数大大增强。本公司开辟的试剂盒具体酪胺荧光染料为以下其中一种粗鲁多 种：TYR-480Plus ，TYR-520Plus ，TYR-570Plus ，TYR-620Plus ，TYR-690Plus ，TYR-780Plus 。此试剂盒中 的荧光染料可单独或合营使用。不错已毕单标、双标、三标以及更多重荧光放大/多重同源抗体荧光符号等 功能，极大丰富了此试剂盒的内涵。
四色多重免疫荧光试剂盒 试剂盒规格：100T
储存温度：4 度，一年有用
试剂盒构成：
称号货号规格保存条目
TYR-520Plus 荧光染料RC001浓缩型，50ul ，200x4℃
TYR-570Plus 荧光染料RC002浓缩型，50ul ，200x4℃
TYR-690Plus 荧光染料RC004浓缩型，50ul ，200x4℃
TSA bufferRCB008624mL4℃
HRP 山羊抗兔/鼠通用二抗RCB05415mL4℃
Dapi 染液(即用型)RC0510mL4℃
抗体稀释液RCT00240mL4℃
C神偷拍3%过氧化氢RC01240mL4℃
染料使用次序：TSA 荧光染料响应液 =TYR-xxxPlus 荧光染料+TSA buffer;TYR-xxxPlus 荧光染料：TSA buffer=1：200;TYR-xxxPlus 荧光染料与 TSA buffer 的稀释比例不错字据具体情况天真蜕变优化，最好规模为 1:50-- 1:400(1:200 大部分情况能得回最好斥逐);一般提议若一抗孵育时间常温 1h-3h 内，提议稀释比例 1:50- 1:200， 若一抗孵育时间 4 渡过夜(12h 或以上)，提议稀释比例 1:200- 1:400 或更高。
持重操作智力
1 、样本准备：
1)石蜡切片：挨次将切片放入二甲bⅠ15min-二甲bⅡ15min-无水酒精Ⅰ5min-无水酒精Ⅱ5min-95%酒精 5min-85%酒精 5min-75%酒精 5min ，蒸馏水洗。
2)冰冻切片：冰冻切片固定 10-30min，PBS 洗 5min，重迭 3 次，滴加 0.3% triton-X100 破膜液通透 20min，PBS 洗 5min ，重迭 3 次。
3)细胞爬片粗鲁细胞涂片：细胞样本固定 10-30min ，PBS 洗 5min 重迭 3 次，滴加 0.3% triton-X100 破膜液通透 20min ，PBS 洗 5min ，重迭 3 次。
2、抗原竖立：组织切片置于盛满 PH 9.0 EDTA 碱性抗原竖立液粗鲁 PH6.0 柠檬酸竖立缓冲液的竖立盒中于 微波炉内进行抗原竖立(也不错用高压 1-2min 100 度水煮 15min 95 度水浴 20min 等其他热竖立次序)。中 火 8min ，媾和 8min ，转中低火 7min ，此经过中应防患缓冲液过度挥发，切勿干片。 当然冷却后将玻片置 于 PBS(PH7.4) 中在磨灭摇床上悠扬洗涤 3 次，每次 5min 。(竖立液和竖立条目字据组织类型以及抗原类 型来笃定，冰冻切片和细胞样本可不详此智力)。
3 、阻断内源性过氧化物酶：切片放入 3%过氧化氢溶液，室温避光孵育 15 min ，将玻片置于 PBS(PH7.4)中在磨灭摇床上悠扬洗涤 3 次，每次 5min。
4 、非特异性靶点紧闭:切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈(防患抗体流走)，在圈内滴加用抗体稀释液(粗鲁其他紧闭液 3%BSA 粗鲁山羊血清)均匀隐敝组织，室温紧闭 30min 。罕见讲明：抗体稀释液内含有多样保护剂以及防腐剂，不错用来紧闭 粗鲁 稀释一抗，稀释后的一抗不错弥远四度保存(在常温下也不错保存一个月之久)
5 、加一抗：轻轻放手紧闭液，在切片上滴加用抗体稀释液稀释好的的一抗 X ，切片平放于避光湿盒内 4°C孵育过夜粗鲁 37 度 1-2h(湿盒内加极少水防患抗体挥发);
6 、加 hrp 二抗：玻片置于 PBS(PH7.4) 中在磨灭摇床上悠扬洗涤 3 次，每次 5min 。切片稍甩干后在圈内 滴加与一抗相应种属的 hrp 二抗隐敝组织，避光室温孵育 50min ，PBS 洗三次。罕见讲明：本试剂盒内自带 的 hrp 山羊抗兔/鼠通用二抗为即用型，具有超高智谋度，随时可用，无需树立。
7 、TSA 荧光染料响应液响应：浓缩型荧光染料与 TSA buffer 按照 1:50- 1:200 的比例夹杂均匀，切片滴加配 好的 TSA 荧光染料响应液均匀隐敝组织室温响应 1- 15min(最好时间 5min- 10min)，PBS 洗三次(预执行 可先染 1min洗干净荧光染料后显微镜下不雅察染色后果，要是阳性弱持续滴加荧光染料加强染色强度直至顺应强度后持续进行下一步)。
8 、抗体洗脱：石蜡切片置于抗原竖立液中 95 度水浴 25-40min(字据不同抗体亲和力 天真蜕变时间)粗鲁 滴加适量 37 度预热至都备融化的mIHC 专用抗体洗脱液(冰冻切片 爬片 骨组织提议用)隐敝样本，37 度舍弃 5-20 分钟，弃去洗脱液，再次滴加适量抗体洗脱液隐敝样本 37 度舍弃 5-20 分钟，弃洗脱液，PBS 洗三次，每次 5 分钟(石蜡切片可用热竖立洗脱粗鲁抗体洗脱液洗脱，细胞及冰切切片需用抗体洗脱液进行洗脱)
9 、 重迭 3-8 智力(换用另外一种 TYR-XXXPLus 荧光染料)---第二轮符号
10 、重迭 3-8 智力(换用另外一种 TYR-XXXPLus 荧光染料)---第三轮符号
11、重迭 3-7 智力(换用另外一种 TYR-XXXPLus 荧光染料)---第四轮符号
12、DAPI 复染细胞核：玻片置于 PBS(PH7.4)中在磨灭摇床上悠扬洗涤 3 次，每次 5min 。切片稍甩干后在圈内滴加 DAPI 即用型染液，避光室温孵育 5min-20min。
13 、封片：玻片置于 PBS(PH7.4)中在磨灭摇床上悠扬洗涤 3 次，每次 5min 。切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片(我司有相应居品)。
14 、镜检拍照：切片于荧皎白微镜/共聚焦/多通说念荧光扫描仪/多光谱成像系统下不雅察并集聚图像。
染料引发波长辐射波长
DAPI 蓝色350420
TYR-480Plus450480
TYR-520Plus 绿色490520
TYR-570Plus 红色550570
TYR-620Plus590620
TYR-690Plus630690
TYR-780Plus750780
四色多重免疫荧光试剂盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家有益从事生物技艺谋划居品，励志研发和销售的抽象性生物公司，居品远销多个国度和地区，咱们将一如既往地摄取“一切为了知足客户的需求"的筹谋目的;自由竖立“以客户需求为准则、以商场需求为导向，不休开辟高质地的新址品ai 人妖，提供客户振奋的抽象就业质地"的标的。
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